L’immunofluorescenza, come l’immunoistochimica, è un metodo altamente specifico per la rilevazione di determinati antigeni presenti nel tessuto o nelle cellule da esaminare. Su una sezione di tessuto o su cellule opportunamente preparate, si pone l’anticorpo specifico per l’antigene da analizzare. Otterremo così una reazione immunitaria antigene-anticorpo. Si possono utilizzare sia anticorpi direttamente coniugati a molecole fuorescenti (fluorocromi, ad es. FITC, TRITC, PE, ecc.) ed in questo caso si parla di immunofluorescenza diretta, oppure la reazione antigene anticorpo viene evidenziata utilizzando un secondo anticorpo coniugato ad un fluorocromo, specifico per il primo anticorpo, in questo caso si parla di immunofluorescenza indiretta. Il campione così “colorato” sarà poi analizzato mediante microscopio a fluorescenza o microscopio confocale.
Figura S34. Cellule della linea cellulare HeLa. In questa immagine, ottenuta con un microscopio confocale, è stata evidenziata, con un anticorpo specifico, la componente del citoscheletro costituita dalla proteina tubulina. L'immagine è una ricostruzione tridimensionale ottenuta utilizzando analisi di piani seriali (dalla base all'apice della cellula). Cortesia di Silvia Bruno, Dipartimento di Medicina Sperimentale, Università di Genova.
Figura S35. (A) Linea cellulare SKBR3 transfettata con SH3BGRL3-FLAG. SH3BGRL3 è stato rivelato con un anticorpo anti-FLAG verde mentre la fluorescenza rossa deriva da anticorpi anti-Erbb2. Il nucleo è colorato in blu (DAPI). (B) Linea cellulare SKBR3 colorata con anticorpi anti-Erbb2 (rosso) e anti Miosina 1C (verde). Nucleo colorato con DAPI (blu).
Figura S36. Milza umana. Follicolo linfoide secondario. Sono stati evidenziati i linfociti B componenti il follicolo che esprimono sulla membrana plasmatica le molecole CD27 (in rosso) e IgD (in verde). In blu (colorante fluorescente DAPI) sono evidenziati i nuclei di tutte le cellule componenti il follicolo. Nel quadrante in basso a destra abbiamo la sovrapposizione dei diversi colori: le cellule che esprimono solo CD27 sono state evidenziate con la colorazione virtuale rosa (blu + rosso), quelle che esprimono solo IgD in azzurro (blu + verde). Se ne deduce che in questo follicolo non sono presenti linfociti B che esprimono sulla membrana plasmatica sia CD27 che IgD (che sarebbero evidenziate in bianco: blu + rosso + verde). Cortesia di Silvia Bruno, Dipartimento di Medicina Sperimentale, Università di Genova.
Figura S37. Cellule HeLa transfettate con PML-GFP, che emette fluorescenza verde, e colorate con anticorpi anti-fibrillarina (blu, proteina del nucleolo), anti-GM130 (rosa, proteina del cis-Golgi) e anti-MHC classe I (rosso, proteina della membrana plasmatica).